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酶联免疫吸附实验（ELISA）已经成为实验室常用的检测蛋白含量变化的实验技术，常用的检测方法是用抗原包被孔板，然后用一抗和二抗检测抗原的变化。这里使用两种抗体的原因一方面是信号放大的需要，另一方面是要减少成本。假如每种抗体都用酶或者荧光素标记的话，那将会需要多少种标记的抗体呢？而且可以肯定价格一定不菲。而用标记二抗的方法就可以大大减少需要标记抗体的数目，同时也能提高标记抗体的效用，这样就能用尽量少的标记抗体满足尽量多的实验要求。

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●使用 RIPA 提取的总蛋白总结●： 1. 并非是真正意义上的总蛋白，相当一部分蛋白丢失在弃去的不可溶组分中。 2. 很多常用的内参，如 Actin，tubulin，LaminA，H3 等均在 RIPA 不可溶组分中被丢失。 3. 目标蛋白可能会在 RIPA 不可溶组分中被丢失，也可能不被丢失，具有不可预见性，非选择性。 4. 同种蛋白在不同样品中丢失的情况并不相同，蛋白丢失并不成比例。 5. 利用目的蛋白和内参比值做校正会出现偏差，不适合 WB 目的蛋白的半定量分析。

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编辑：小檀20180921