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●稳定转染●：即进入细胞的质粒整合入细胞基因组中，并能随细胞分裂稳定传递下去。这是相对瞬时转染而言的。 瞬时转染的表达时间短暂，外源基因导入整合基因组的几率非常低，绝大部分以游离形式存在，不能随细胞分裂而一同复制，导致*后拷贝数被稀释，无法达到持续表达外源基因的目的。一般用转染橙子视频旧款进行质粒转染，多为瞬时转染。 ●一般如下情况需要构建稳定株●： 1. 长期在目的细胞中研究基因功能，通过构建稳定株，可以大大降低频繁转染或者病毒包装的成本，也极大方便实验研究； 2. 部分蛋白半衰期极长，瞬时 RNA 只能干扰表达，无法去除已经表达的目的蛋白，通过构建稳定株可以实现更好的基因干扰效果； 3. 瞬转往往会引入极高拷贝数的表达，导致因为人为因素造成实验结果的不**，构建稳定株可以帮助筛选拷贝数适量的细胞进行实验研究； 4. 需要用诱导表达系统的，主要是一些致死基因或者是需要时空表达的； 5. 需要用细胞做动物实验的，比如裸鼠成瘤等，往往需要构建成稳转株。

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酶联免疫吸附实验（ELISA）已经成为实验室常用的检测蛋白含量变化的实验技术，常用的检测方法是用抗原包被孔板，然后用一抗和二抗检测抗原的变化。这里使用两种抗体的原因一方面是信号放大的需要，另一方面是要减少成本。假如每种抗体都用酶或者荧光素标记的话，那将会需要多少种标记的抗体呢？而且可以肯定价格一定不菲。而用标记二抗的方法就可以大大减少需要标记抗体的数目，同时也能提高标记抗体的效用，这样就能用尽量少的标记抗体满足尽量多的实验要求。

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编辑：小檀20180907