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原理和程序
MethylFlash™ 羟甲基化 DNA 定量91橙子视频（比色法）包含了对整体 DNA 羟甲基化进行比色定量所需的所有橙子视频旧款。在该检测中，DNA 结合到剥离经过专门处理的孔中，这些孔具有高 DNA 亲和力。使用捕获和检测抗体检测 DNA 的羟甲基化部分，然后通过在微孔板分光光度计中读取 450 nm 处的吸光度，通过类似 ELISA 的反应进行定量。羟甲基化 DNA 的量与测得的 OD 强度成正比，这可以通过91橙子视频中包含的两种不同 DNA 样品的相对羟甲基化状态公式或使用标准曲线对 5-羟甲基胞嘧啶 （5-hmC） 的绝/对定量进行计算。

简单、快速、灵活
整个比色测定具有易于遵循的步骤，方便快捷，可在 3 小时 45 分钟内完成。条孔微孔板规格允许在手动或高通量分析中进行灵活的分析。91橙子视频包含通用阳性和阴性对照，用于定量来自任何物种（如哺乳动物、植物、真菌、细菌和病毒）的羟甲基化 DNA。

安/全方便
定量整体 DNA 羟甲基化所需的所有橙子视频旧款，包括阴性对照和阳性对照，都方便地包装在91橙子视频中。DNA 样品的直接比色定量取代了过时或劣质的方法，无需 DNA 消化/变性、放射性、提取或色谱分析。

高灵敏度和特异性
新颖的程序和专有的91橙子视频组成能够以高灵敏度和特异性实现羟甲基化 DNA 的准确定量。起始 DNA 的检测限可低至 40 pg 的羟甲基化 DNA，动态范围为 40 pg 至 20 ng（见图 2）。分析灵敏度比 HPLC 高约 10 倍（0.008% 对 0.08%）。与甲基胞嘧啶和未甲基化的胞嘧啶没有交叉反应性，因此仅检测到羟甲基化 DNA （5-hmC）（见图 3）。

反应灵敏、可靠且实用
基于其工作原理和微孔板形式，该91橙子视频可实际和常规地用于各种形式的任何物种，包括培养细胞、新鲜和冷冻组织、石蜡包埋组织、血浆/血清样品和体液样品。为了证明该91橙子视频的功能，它已成功用于定量小鼠大脑和 HeLa 细胞 DNA 中 5-hmC 的含量。MethylFlash™ 91橙子视频测得的 5-hmC 百分比与 HPLC 和 LC-MS 方法检测的百分比平行且相当（参见表 1）。通过使用该91橙子视频，首/次在正常人脑和结肠组织中发现了高丰度的 5-hmC。此外，它表明 5-hmC 分别占正常人脑和结肠组织中总甲基化胞嘧啶（5-mC 加 5-hmC）的 32% 和 16%（见表 2）。相比之下，结肠癌细胞系 （HCT116） 和宫颈癌细胞系 （HeLa） 中的 5-hmC 较低或不存在（参见图 4A 和 4B）。

图 2.证明 MethylFlash™ 91橙子视频实现了 5-羟甲基胞嘧啶检测的高灵敏度。将合成的羟甲基化 DNA 以不同浓度加入检测孔中，然后用 MethylFlash™ 羟甲基化 DNA 定量91橙子视频进行测量。

图 3.证明 MethylFlash™ 91橙子视频实现了 5-羟甲基胞嘧啶检测的高特异性。将合成的未甲基化 DNA（仅包含胞嘧啶）、甲基化 DNA（仅包含 5-甲基胞嘧啶）和羟甲基化 DNA 标准品（仅包含 5-羟甲基胞嘧啶）以不同浓度加入检测孔中，然后用 MethylFlash™ 羟甲基化 DNA 定量91橙子视频进行测量。

图 4.证明人脑和结肠组织中 5-羟甲基胞嘧啶丰度高。将 200 ng 从不同组织或细胞中分离的 DNA 加入检测孔中，并使用 MethylFlash™ 羟甲基化 DNA 定量91橙子视频测量 DNA 的羟甲基化部分。A： 在各种 DNA 样品中测量的 OD 强度。B：各种组织和细胞中羟甲基化 DNA 的百分比。